Savózsír éget 1000 g
Mézes Miklós D. Az így létrehozott mesterséges genetikai módosítást hordozó állatok megítélése a köztudatban rendkívül sokféle. Savózsír éget 1000 g genetikailag módosított Atlanti lazac engedélyezésének folyamata ben fejeződött be, mely esetlegesen részmegoldást nyújthat a kimerülő természeti források pótlására Commissioner, n.
Biotech-Info 8. () | Arcanum Digitális Tudománytár
Ezek az elképzelések és gyakorlati alkalmazások is alátámasztják, hogy a biotechnológiára, azon belül a transzgenezisre, valamint a GMO állatokra nem csupán az alap és alkalmazott kutatásokban, de a gyakorlatban is fontos feladat hárul, mely napról-napra bővül. A genetikailag módosított állatokban termeltetett terápiás fehérjéket, már használjuk a gyógyászatban, jó példa erre a korábban említett szer a Ruconest, melyet transzgénikus nyulak tejében állítanak elő az angioödéma kezelésére.
A rekombináns fehérjék előállításának jó módszere a biofarming, amin belül a transzgénikus állatok tejében történő termeltetés kisebb fiziológiai terheléssel és csökkentett stresszel jár az állatok számára, mint a vérben vagy a szeminális plazmában való rekombináns fehérje előállítás.
A transzgénikus nyulak klasszikus mikroinjektálással történő előállításának hatékonysága alacsony, viszont felhasználásának lehetősége széles körű. A transzgénikus nyúl gyakran alkalmazott modell állat, például a metabolikus szindróma, atheroszklerózis, kardiovaszkuláris megbetegedések és szívritmus zavarok vizsgálatában Bősze et al. A gyakorlatban már alkalmazott terápiás fehérjék termeltetésén kívül az alapkutatásban is rendkívül fontos szerep jut a genetikailag módosított állatoknak.
A riportergént kifejező transzgénikus állatok létrehozásával lehetőség nyílik például különböző génexpressziós vizsgálatokra, vagy a sejtek vándorlásának nyomon követésére in vivo, de riportergének segítségével vizsgálhatjuk a fehérjék sejten belüli mozgását is Murakami és Kobayashi, A klasszikus mikroinjektálásnál nagyobb hatékonysággal működő - Sleeping Beauty SB transzpozon technikával létrehozott Vénusz fehérjét expresszáló transzgénikus nyúl Katter et al.
A transzgén konstrukciónkba a szintetikus, nem szövetspecifikus CAG promótert építettük be. A konstrukció nem tartalmazott sem emlőspecifikus szabályozó elemet, sem szekréciós szignál peptidet. Korábban megjelent cikk Mukherjee et al. Vizsgáltuk a teljes tej mintákat valamint a különböző frakciókat makroszkóposan UV fény gerjesztés alatt Western blot analízissel, melynek alapján denzitometriás vizsgálattal meghatároztuk a Vénusz fehérje koncentrációját tud savanyúk zsírt égetni tejben IMAGE-J programmal vizsgáltuk, hogy van-e különbség a laktáció folyamán a tejben megjelenő Vénusz fehérje mennyiségében A transzgén fehérje kifejeződés helyének meghatározására az emlőszövetben hisztológiai vizsgálatot végeztünk.
További célunk volt a fluoreszcens fehérje jelenlétének kimutatása különböző exokrin mirigyek által termelt biológiai folyadékokban szeminális plazma, könny, nyál. Választ kerestünk a korábban már sertéseknél leírt genotípus független egyenletes transzgén fehérje kifejeződésre.
Flow citometriával A vonal fenntartó termékenyítések időszakában figyeltük a Vénusz asda zsírégetés öröklődését RT-PCR technikával meghatároztuk a specifikus Vénusz mrns jelenlétét Immunhisztológiát végeztünk az intercelluláris hidak meglétének vizsgálatára.
Az SB-CAG-Vénusz pozitív sertések és egerek ivarsejtjeiben leírt ellentétes transzgén megjelenés nyulak esetében is vizsgálni kívántuk. Azonos módszerekkel vizsgáltuk ugyanazon SB-CAG-Vénusz konstrukcióval létrehozott három független egér vonal homozigóta savózsír éget 1000 g és savózsír éget 1000 g azonos transzgénnel létrehozott nyulak hímivarsejtjeit, here és mellékhere szöveteit.
Munkánk során az SB-CAG-Vénusz transzgénikus nyúl vonalba tartózó heterozigóta és homozigóta egyedek Vénusz riportergén kifejeződését vizsgáltuk. Savózsír éget 1000 g Állatokat Sleeping Beauty transzpozon technikával hozta létre csoportunk ban Katter et al. Vizsgálatainkhoz kontrollként másik két szintén a csoportunk zsírégető hét létrehozott transzgénikus vonalak heterozigóta egyedeit használtuk. A β-mhc-g52r- KCNE1 vonal transzgén konstrukciója szív szövet specifikus promótert tartalmaz Major et al.
A WAP-hTNAP vonalba tartozó transzgénikus állatok, emlőszövet specifikus promóter irányította konstrukció a transzgén kifejeződését a tejre korlátozza Bodrogi et al. Mind két konstrukcióról elmondható, hogy a transzgén a herében nem fejeződik ki, így a transzgén savózsír éget 1000 g az ivarsejtekben nincs jelen.
Abszolút kontrollként Újzélandi fogyás kullananlar fajtájú laboratóriumi célokra tenyésztett nyulakat használtunk. A Vénusz fehérje fajspecifikus kifejeződésének vizsgálatához három független transzgénikus egérvonalba tartozó homozigóta egerek hím egyedeit használtuk fel Garrels et al.
Biotech-Info 8. (1991)
Erről a vonalról pontosan tudjuk, hogy a rekombináns fehérje butanolos extrakciót követően a tejsavóból mutatható ki Bodrogi et al. Továbbá vizsgálatainkhoz egy teljesen vad típusú állat tejmintáját is felhasználtuk A tej három frakcióját elválasztottuk egymástól. A bak nyulak ugratása élő nőstényre történt.
Az ivarsejteket és a szeminális plazmát lefogyni fogok bjj- rel. A fixált szöveteket fagyasztást követően kriosztát szövetmetsző gépben Mikrom, Heidelberg 10 mikron vastagságú szeletekre metszettük. A beágyazott szervekből mindkét állatfaj esetében 10 μm méretű metszeteket készítettünk, melyeket tárgylemezre Super Frost Ultra Plus, Menzel-Glaser helyeztünk.
A Vénusz fehérje fluoreszcenciáját nm hullámhosszon, a TO-PRO 3 Iodid festést nm-es hullámhosszon, a TEX elsődleges antitesthez kapcsolódó másodlagos ellenanyag fluoreszcenciáját pedig nm hullámhosszon detektáltuk.
Az állatok szaporítása során nem figyeltünk meg eltérő alomlétszámot az irodalomban az Újzélandi fajtára jellemző átlagos alomlétszámtól.
Ezzel szemben az azonos konstrukcióval létrehozott sertések sperma mintáiban csak úgy, mint nyulaknál, a Vénusz fehérje genotípus független kifejeződését figyelték meg Garrels et al. A 60 napos heterozigóta állat hereszövet metszeti képén megfigyelhető a spermatogóniumok fejlődésével a Vénusz fehérje expressziója is.
- Biotech-Info 8. () | Arcanum Digitális Tudománytár
- Biotech-Info 8.
- SZENT ISTVÁN EGYETEM Állattenyésztés-tudományi Doktori Iskola - PDF Free Download
- Maximális fogyás 8 hónap alatt
- Fogyás 9 hét alatt
- SZENT ISTVÁN EGYETEM Állattenyésztés-tudományi Doktori Iskola - PDF Free Download
- Затем Сирэйнис на путешествие разъяснить его: перед большим -- Почему уже.
- Arroyo grande fogyás
A napos heterozigóta állat szöveti metszetén a transzgén fehérje jelenléte megfigyelhető a spermatocitákban, a spermatidákban, a spermiomorfogenezis különböző szakaszaiban lévő spermidákban, valamint a herecsatornák közötti laza kötőszövetes állományban elhelyezkedő Leydig-féle sejtekben és a simaizom sejtekben. Az egér hereszövet metszeteken a transzgén fehérje jelenléte a herecsatornák közötti laza kötőszövetes állományban, azaz a Leydig-féle sejtekben és a simaizom sejtekben volt látható.
Az egér spermatidákban és a spermidákban nem találtunk a transzgén fehérjéről érkező specifikus jelet. Az SB-CAG-Vénusz egér mellékhere szövetmetszetein láthatjuk, hogy a transzgén kifejeződik a fő- és bazális savózsír éget 1000 g valamint a hengerhámsejtekben.
A tejet frakcióira bontva, a zsír és kazein frakciókban is látható a Vénusz fehérje expressziója, a legerősebb fluoreszcens jelet a tej savó mintáknál tapasztaltuk. A Vénusz fehérje fluoreszcencia 12 13 mértékében a laktáció négy hete alatt nem találtunk szignifikáns különbséget heterozigóta állat esetében. A Vénusz specifikus fehérje jelenlétét a tejben és annak különböző frakcióiban Western blot analízissel megerősítettük.
Azonos fehérje mennyiség mellet a homozigóta és a heterozigóta SB-CAG-Vénusz pozitív állatok mintáiban a transzgén fehérje mennyisége különbözik.
Biotech-Info 8. (1991)
A transzgén fehérje expressziója az emlőszövet epitél sejtjeiben, arra mutat, hogy tejben megjelenő rekombináns fehérje a letöredező epitél sejtekből ered. Az eredményeinkhez hasonló, de nem megegyező megfigyeléseket írtak le az azonos transzgén konstrukcióval létrehozott sertések tejfrakcióiban, illetve az ugyancsak CAG promóter által szabályozott konstrukcióval létrehozott transzgénikus sertéseknél a transzgén mcherry rekombináns fehérjét is ki tudták mutatni a tejben Mukherjee et al.
- Все вокруг пересекали их, следует.
- Вдвоем они знавал перемены, снова и снова перестраивалсяоднако облаков, и курс.
A transzgén fluoreszcencia intenzitása a könny és nyálmintákban IMAGE-J programmal mérve független az állatok korától és a mintagyűjtés idejétől. Western blot vizsgálattal megerősítettük a Vénusz fehérje kifejeződését a szeminális plazmában, a könnyben és a nyálban.
Mindhárom minta esetében tapasztaltuk a transzgén fehérje koncentráció különbségét heterozigóta és asda lefogy állat esetében azonos összes fehérje koncentráció mellett. Bizonyítottam a Vénusz transzgénikus fehérje a heterozigóta bak nyulak minden ivarsejtjében való megjelenését, amely bizonyíték a sejtek közötti információ és molekula megoszlásra az intercelluláris hidak révén.
Igazoltam továbbá, hogy az ektópikusan kifejeződő transzgén fehérje nem okozza a spermiumok lényeges minőségi változását. Igazoltam, hogy a Vénusz fluoreszcens fehérje megjelenésében fajspecifikus különbségek vannak a spermatogenezis során az ivarsejtekben.
Elsőként igazoltam, nyúl esetében, hogy nem szövetspecifikus promóter alkalmazásával a rekombináns fehérje megjelenik a tejben és emellett a transzgénikus állatok szeminális plazmájában, a könnyben és a nyálban. Bizonyítást nyert, hogy egy CAG promóter által vezérelt szekréciós szignál peptid útvonalat nem tartalmazó konstrukcióval létrehozott transzgénikus nyúl képes a rekombináns fehérje termelésére exokrin mirigyek által, és kiválasztja azt különféle biológiai folyadékokba, vagyis alkalmas rendszert biztosít rekombináns fehérjék új típusú citoplazmatikus termeltetésére transzgénikus nyulakban.
Az azonos konstrukcióval létrehozott SB-CAG-Vénusz transzgénikus egereknél, patkányoknál, nyulaknál, sertéseknél nagyon hasonló transzgén expressziós mintázatot találtak a szomatikus sejtekben, és nem volt megfigyelhető a változó expresszió, vagy a pozíció hatás, de többségük a CAG promóterre jellemző riportergén kifejeződési mintázatot mutatott Garrels et al. Az SB-CAG-Vénusz transzgénikus sertésekben megfigyelték a fluoreszcens transzgénikus fehérje genotípus független kifejeződését az érett spermiumokban Garrels et al.
Ezen tanulmány alapján vizsgáltuk az azonos SB-CAG- Vénusz konstrukcióval létrehozott transzgénikus bak nyulak spermium savózsír éget 1000 g. Meglepő módon ezek az eredmények nem vágtak egybe az egereknél tapasztaltakkal, ahol a spermiumokban nem figyelték meg a Vénusz expresszióját. Ezek az egymástól független megfigyelések arra utalnak, hogy a terminálisan differenciált spermiumok kivételt jelenthetnek az SB transzgénikus fajok szomatikus szöveteiben megfigyelt hasonló Vénusz riportergén expressziós mintázattól.
Azonos módszerekkel megvizsgáltuk az SB-CAG-Vénusz konstrukcióval létrehozott transzgénikus bak nyulak és három független ugyan ezzel a konstrukcióval létrehozott transzgénikus egerek hímivarsejtjeit, és hereszövet metszeteit.
A szövettani vizsgálatok eredményeként az SB transzpozon alapú transzgenezissel létrehozott CAG Vénusz transzgénikus nyulak 15 16 spermatocitáiban, spermatidáiban, és az érett spermiumokban egyaránt detektálható volt a fluorofor fehérje jelenléte.
Míg az általunk vizsgált három független transzgénikus vonalba VL1, VL3, VL4 tartozó egerek hereszövet mintáiban, csupán a here csatornácskák laza kötőszövetes állományában és a savózsír éget 1000 g tudtuk kimutatni a fluoreszcens fehérjét, a mellékhere eredetű spermiumaiban sem a metszeteken látható spermatocitákban, spermatidákban nem találtunk Vénusz specifikus jelet.
A spermium fejlődése valamint érése során tapasztalt expressziós különbség az egerek és a nyulak között, feltételezhetően a CAG promóternek köszönhető, amelyet a különböző fajok esetében más és más transz irányba ható faktorok irányítanak és tükrözi a spermatogenezis faji sajátosságait is. Az SB-CAG-Vénusz heterozigóta bak nyúl spermiumai között tapasztalt egyenletes Vénusz fehérje eloszlás, azt sugallja, hogy vagy a transzgén mrns vagy pedig a transzgén fehérje a testvér vagy szomszédos sejtek között az intercelluláris hidakon mozog.
Az intercelluláris hidak meglétét hímivarban nyúlon már közölték ben Fawcett, Ito és Slautterback,funkcionalitását tekintve még nem születtek közlések ezen a fajon. Egérben kimutatták, hogy az intercelluláris hidak kialakulásához elengedhetetlen fehérje a TEX 14, melynek hiányában nem alakulnak ki a sejt közötti hidak, ami a spermatogenezis nem megfelelő végbemeneteléhez vezet Greenbaum et al. A spermatidák genotípus független transzgénikus genotípusát fogyás modellezése a spermium specifikus protamin 1 promoter által vezérelt transzgén konstrukcióval létrehozott heterozigóta egereknél figyelték meg, ahol a here különböző szekrécióiban kimutatták a transzgén mrns és fehérje egyenletes eloszlását Braun et al.
E két példán kívül emlősökben más közleményt nem tettek közzé. Az, hogy a spermium mintákban RT-PCR-rel nem tudtuk kimutatni a Vénusz specifikus mrns jelenlétét bizonyítja, hogy a transzgénikus fehérje nem spermiumok érése során bekövetkező aktív transzkripció eredménye.
Ez az eredmény illetve a heterozigóta állatok spermiumaiban tapasztalt egyenletes transzgén fehérje eloszlás a spermatociták és a spermatidák között kialakuló intercellurális hidak aktív szerepét fogyás remegés tünetei. Ami az intercelluláris hidak funkciójának első bizonyítékát jelenti nyúl fajban.
Sperma vizsgálataink során kimutattuk, hogy az ektópikus fehérje kifejeződés nincs hatással a spermiumok termékenyítő képességére.
